研究業績集

学会発表2009年

タイトル

Novel Monoclonal Antibodies Recognizing the Active State and Conformation of Epidermal Growth Factor Receptor

発表者

Nobuyuki Ise 1),2), Katsutoshi Goishi 1), Shigeki Higashiyama 2)
1) Biotechnology Research Group, Fundamental Research Department, Fujirebio Inc., Tokyo 192-0031, Japan
2) Department of Biochemistry and Molecular Genetics, Ehime University Graduate School of Medicine, Ehime 791-0295, Japan

学会名

第68回日本癌学会学術総会

内容

The precise regulation of epidermal growth factor receptor (EGFR) is crucial to its function in cellular growth control. Although many antibodies against EGFR have been developed and used to analyze its regulation and function, it is yet not easy to analyze activated EGFR separately. The present study provides novel anti-active-EGFR mouse monoclonal antibodies (mAbs). We performed immunoprecipitation, westernbotting, immunofluorescence and epitope-mapping experiments for these mAbs, and examined what properties of activated EGFR our mAbs recognize precisely. Throughout these experiments, we obtained the consequence that the epitopes recognized by these mAbs were the moieties sensitive to conformation change of EGFR induced by its ligand-stimulation, but independent of its autophosphorylation event. Furthermore, our conformation-specific mAbs provided interesting information about the conformation of mutant EGFR previously found in lung cancer. These mAbs are novel useful tools that help us to detect and analyze the active state and conformation of EGFR in various cells or tissues and investigate the mechanism of signal transduction regulated by EGFR.

タイトル

Identification and characterization of a novel angiogenic transcrption factor, ZF50

発表者

大貫秀隆 1)、井上博文 1)、福田信治 1)、中山寛尚 1)、三輪大輔、東山繁樹 1),2)
1)愛媛大学大学院医学系研究科 システムバイオロジー部門 生化学・分子遺伝学分野
2)愛媛大学 プロテオ医学研究センター 細胞増殖・腫瘍制御部門

学会名

がん若手ワークショップ

内容

Both VEGF and Notch signals are essential for the vascular development. These two signals play opposite roles in the regulation of angiogenesis. VEGF and Notch have promotive and inhibitory effects on vascular sprouting, respectively. Here, we report the intermedial players in the cross-talk between VEGF and Notch signaling in vascular sprouting.?In order to identify the molecules that link VEGF signaling to Notch signaling, we performed DNA microarray analysis and identified a zinc finger protein of 50 kDa (ZF50). The knockdown of ZF50 by its specific siRNA disrupted completely VEGF-induced network formation of HUVEC, which was recovered by an inhibitor of Notch signaling. Conversely, overexpression of ZF50 induced vascular sprouting from aorta in ex vivo without VEGF stimulation. These results suggest that ZF50 would be a downstream component in VEGF signaling that interferes with Notch signaling pathway. To understand the molecular mechanism of ZF50 in detail, we further investigated the effects of ZF50 on Notch signaling molecules. We found that Notch in tracellular domain-induced transcriptional activation was blocked by the overexpression of ZF50, as judged by a luciferase reporter assay. In real-time PCR, ZF50 knockdown upregulated the expression of a Notch target gene, HEY1, indcating the inhibitory effects of ZF50 on Notch signaling. We also found that ZF50 interacts with CBF1, a nuclear mediator of Notch signaling, and decreased its stability. We also present in vivo data of developmental retina in mouse.?Taken together, we propose that ZF50 is a novel intermedial player in the cross-talk between VEGF and Notch signaling in vascular sprouting.

タイトル

間葉系幹細胞用の無血清維持培地および無血清分化誘導培地

発表者

堀田 佳之

学会名

独立行政法人科学技術振興機構主催
戦略的イノベーション創出推進事業のためのワークショップ
-安全なiPS細胞を用いた創薬・診断・再生医療の実現に向けて-

内容

骨髄由来間葉系幹細胞は、脂肪細胞、骨細胞、軟骨細胞などの組織細胞へ分化することが知られている。近年、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞と同様に間葉系幹細胞も、再生医療・細胞治療の候補細胞となっている。しかし、一般的に間葉系幹細胞の培養は、動物血清を含んだ培地で培養されている。そして、この動物血清は、製品ロットによって性能が異なることや未知のウイルスなどに感染する危険性が指摘されている。そこで、我々は、無血清培地の開発を試みた結果、間葉系幹細胞用の維持培地、脂肪細胞分化誘導培地および骨細胞分化誘導培地を開発に成功した。
我々の開発した無血清培地は、動物血清培地で生じていた問題を回避することが可能になると共に様々な研究分野での利用も可能であると考えている。

タイトル

DEVELOPMENT OF SERUM-FREE MEDIUM FOR MAINTENANCE AND DIFFERENTIATION OF HUMAN MESENCHYMAL STEM CELLS

発表者

Yoshiyuki Hotta, Katsutoshi Goishi

学会名

International Society for Stem Cell Research (ISSCR) 7th Annual Meeting

内容

Human bone marrow-derived mesenchymal stem cells (hMSCs) are multipotent cells that can be differentiated into adipocytes and osteocytes, and are promising candidates for regenerative medicine. These cells are routinely maintained and differentiated in medium supplemented with FBS and/or undefined non-human components which may become potentially harmful sources of undesired pathogens. For successful clinical applications, development of serum-free and chemically defined medium for maintenance and differentiation is required.
We have developed novel three types of serum-free media for the maintenance, and adipogenic and osteogenic differentiation of hMSCs without components of animal origins. hMSCs cultured in our maintenance medium grow equally well to those cultured in conventional serum-containing medium (DMEM+10%FBS), and have been shown to maintain the multipotency. hMSCs cultured in our differentiation medium can be induced to differentiate into adipocytes or osteocytes as efficient as conventional serum-containing medium. Our results were confirmed by each specific cell staining and cell markers. The drawback of the animal origin components will be overcome by our serum-free media, which lead to the establishment of the complete animal-free hMSC culture system for future therapeutic use.

タイトル

Performance evaluation of new assay (CLEIA) reagents for KL-6

発表者

S. Kitajima, H. Murakami, K. Moriyama, E. Kobayashi and Y. Ashihara

学会名

2009 AACC Annual Meeting

内容

KL-6測定試薬の性能評価と間質性肺炎診断試薬としての有用性評価を実施した。その結果、同時再現性、干渉物質の影響に関する評価結果は良好であった。各種疾検体における測定値分布を検討した結果、測定値が500U/mL以上となる症例率は、肺炎 22.7%、喘息 5.9%、結核 18.2%、肺 MAC 症 40%、ニューモシスチス肺炎66.7%、サルコドーシス 13.6%、肺がん 32.5%であった。間質性肺炎は 80%と他の疾患に比べて高値であった。

タイトル

当院性感染症外来男性受診者の咽頭におけるクラミジアおよび淋菌の検出

発表者

亀岡博(1)、丹羽敏博柄澤英治
(1)亀岡クリニック 泌尿器科

学会名

日本性感染症学会第22回学術大会

内容

性感染症外来男性受診者183名を対象にアプティマCombo2クラミジア/ゴノレアを用いた咽頭感染の検討を行った。クラミジア性尿道炎患者19名中12名、淋菌性尿道炎患者19名中15名、淋菌性クラミジア性尿道炎患者6名中5名、性器陰性被験者139名中17名で咽頭感染が認められた。咽頭感染は無症候のまま放置されることも多く、性器とは異なる感染の可能性もあり、高感度試薬による咽頭検査の重要性が示唆された。

タイトル

Whispering gallery mode excitations in fluorescent microparticles as novel transducer mechanism for optical biosensing.

発表者

Michael Himmelhaus

学会名

Invited talk at the Max-Planck-Institute for Metal Research (Stuttgart, Germany)

内容

We report about our recent progress in the utilization of fluorescent microparticles of few micrometers in diameter as novel microscopic optical biosensors.
Whispering gallery modes (WGMs) are generated inside of the particles by fluorescence excitation, which then probe the particle/ambient interface and thus comprise a highly sensitive transducer mechanism for the detection of adsorbates at the particle surface. Detection is mediated via observation of the fluorescent emission of the particles, thereby rendering them into fully radiation ? and thus remotely ? controlled optical sensors.
Besides the development of novel optical transducer mechanisms, also the way of their biofunctionalization is of high importance. In this context, we report about improvements in the avidity of surface-adsorbed antibodies, which we achieved by their nanopatterning on flat substrates, i.e., surface plasmon resonance chips. In the future, we will aim at an implementation of this technique into the WGM sensor functionalization, thereby improving the overall performance of the system.

タイトル

牛海綿状脳症診断用酵素抗体反応キットの開発

発表者

庄司真一宮川英二梅谷 淳安住純一

学会名

アグリビジネス創出フェア

内容

1985年に英国で牛海綿状脳症(Bovine Spongiform Encephalopathy:BSE)が発生した。日本では2001年9月に初めてBSEが発見され、全頭検査による食肉の安全性の確保と全死亡牛検査によるサーベランス体制が整備された。当時のBSE検査には、輸入検査キットが使用されていたが、安定供給できる国産キットの開発が望まれていた。「フレライザBSE」は検査時間が短くなり、測定データの安定性も含めて作業現場から高い評価を得ている。

タイトル

無血清条件下での脂肪組織由来多能性幹細胞(hMADS)の脂肪細胞および骨細胞分化

発表者

堀田佳之小見和也碁石勝利

学会名

第9回 日本再生医療学会総会

内容

本研究では、我々が開発した無血清分化誘導培地が脂肪組織由来多能性幹細胞(hMADS細胞)の分化誘導に適用可能であるか検討した。脂肪分化誘導培地を用いた場合、培養期間依存的にAdiponectin分泌量および細胞内油滴量の増加が確認された。また、骨細胞分化誘導培地を用いた場合には、ALP活性の上昇が確認された。以上の結果より、本無血分化誘導清培地を用いることで、骨髄由来間葉系幹細胞のみならずhMADS細胞についても脂肪細胞および骨細胞への分化誘導が可能であることが示された。