研究業績集

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蛍光相互相関分光法を用いた異常型プリオン蛋白質の検出

発表者

藤井文彦,堀内基広(北海道大学),上野雅由,坂田啓司,長尾一生,田村守,金城政孝(北海道大学)

学会名

2006.3.1
2006年度日本生物物理学会北海道支部例会(北海道)

内容

蛍光相互相関分光法(FCCS)により緩衝液中で組換え牛プリオンタンパク質(rBoPrP)の検出を試みた結果、検出限界値は0.13 nMであった。rBoPrPを牛脳抽出液中に添加して検出を試みた場合も、検出限界値は0.13 nMであった。また、動物実験としてスクレイピー感染マウス脳から調製した試料では、4-6倍希釈(0.13 nMに相当)まで検出可能であった。これらの結果は、BSE検査で用いられているELISAと比較した場合、ほぼ同等の感度であった。今後は、実際的な感染牛からの検出を計画している。

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Ultraflat Ternary Nanopatterns Fabricated via Colloidal Lithography

発表者

J. P. Wright, O. Worsfold, C. Whitehouse, M. Himmelhaus

学会名

2006.3.29
21st General Conference of the Condensed Matter Division, European Physical Society　（ドイツ）

内容

Colloidal lithography on mica has been combined with subsequent thermal evaporation, sputtering, and template-stripping processes to produce ultraflat ternary nanopatterns of large lateral extension. As confirmed by atomic/friction force microscopy (AFM/FFM) the patterns provide a new type of model surface particularly useful for applications that demand proper distinction between surface chemistry and topography. We found that the size of the patches, which can be fabricated by our method, is reduced to 60% of the nominal diameter of the colloidal particles used to produce the colloidal mask. Accordingly, the minimum feature size of spherical nanopatterns that can be fabricated by colloidal lithography is significantly reduced.

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Glyceraldehyde-3-phosphate:Ferredoxin Oxidoreductase From Meshophilic Archaea, Methanococcus maripaludis - Characterization of active recombinant GAPOR

発表者

Park M-O

学会名

2006.5.22
American Society for Microbiology(ASM) General Meeting（U.S.A.）

内容

GAPORは、嫌気状態でフェレドキシンの還元とこれに共役するG3Pの酸化とを触媒する働きをもち、これにはタングステン（W）が関与するとされている。しかしWを利用できるのは一部の超高温性菌だけである。我々は、中温性のM. maripaludis 由来GAPORホモログを大腸菌において過剰発現させ、とくにW要求性に着目して特性評価を行った。その結果、GAPORを活性化発現することに成功し、さらにこのGAPORがW以外にもモリブデン（Mo）を有していることを明らかにした。

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Enginnering and evaluating introduced pathways of hydrogen synthesis in microorganisms capable of fermentation

発表者

Patrik Jones, Mohammed Kalim Akhtar, Park M-O

学会名

2006.6.13-16
16th World Hydrogen Energy Conference（France）

内容

An overview of potential methods to enhance H2-production under anaerobic “dark” conditions was presented with an emphasis on the role of oxidoreductases. Yield of H2 per starting substrate is one of the main parameters that influences the economic feasibility of biomass-derived H2-production. Native organisms that synthesize more than 4 moles of H2 per glucose under strictly anaerobic conditions have not been reported. A strategy to reach beyond this key target through metabolic engineering was presented. Reconstitution of NADPH-dependent H2-synthesis was presented as a first example to illustrate the basic working concept. Initially, the scientific focus is on testing the hypothesis that NAD(P)H-dependent H2-synthesis is thermodynamically limited by the partial pressure of H2 under closed conditions. Theoretical calculations were presented, followed by experimental data that demonstrated that the theoretical limit had already been surpassed despite the fact that NADPH-synthesis in wild-type E. coli most likely is strictly limited under anaerobic conditions. It was emphasized that the work is on-going (in progress) and that further experiments will be needed to reach a conclusion on the hypothesis mentioned above.

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Network Robustness and Modularity of Protein Structures in the Identification of Key Residues for the Allosteric Communications

発表者

Antonio del Sol, Marcos J.Arauzo-Bravo, Dolors Amoros, Ruth Nussinov（SAIC-Frederick, Inc., Laboratory of Experimental and Computational Biology,National Cancer Institute）

学会名

2006.8.5
14th Annual International Conference On Intelligent Systems For Molecular Biology （Brazil）

内容

We represent protein structures as residue interacting networks in the analysis of several protein families. We identify fold centrally-conserved residues, which play key roles in the allosteric communications. The modular decomposition of these protein networks characterizes different allosteric sites, with the fold centrally-conserved residues participating in the inter-modular interactions.

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全自動化学発光酵素免疫測定システム「ルミパルスf」による高分子量アディポネクチン測定試薬の開発

発表者

葉山優,谷田利美,奥野武彦,鶴長裕一,北嶋幸子,山本克彦

学会名

2006.9.8
第46回日本臨床化学会年次学術集会　（東京）

内容

特異的且つ簡易にHMW-アディポネクチン（高分子量アディポネクチン）を測定することのできる全自動化学発光酵素免疫測定システム（CLEIA法）を利用した試薬を開発し、試薬性能の評価を実施した。測定再現性、希釈直線性、生体物質の影響、ELISA法との相関性について検討し、何れも良好な成績が得られた。CLEIA法によるHMW-アディポネクチン測定は、全自動で、一時間に120検体の測定が可能であり、且つ再現性、直線性、感度に優れ、共存物質の影響もないことから日常検査に有用であると考えられる。

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BSEスクリーニング検査試薬　フレライザBSEの開発

発表者

山本克彦,宮川英二,安住純一,庄司真一,梅谷淳,上野雅由

学会名

2006.9.9
第46回日本臨床化学会年次学術集会　技術賞受賞講演　（東京）

内容

フレライザBSEは牛海綿状脳症(Bovine Spongiform Encephalopathy：BSE)の酵素免疫測定試薬である。European Commission　The European Food Safety Authority(EFSA)によるラボ評価及びフィールド評価を受け、現在欧州で承認されているBSE検出試薬と同等な感度、特異性、希釈感度を有することが確認された。本試薬は現在都道府県の食肉衛生検査所での食肉用と蓄牛のBSE検査及び家畜保険衛生所での疾病牛の検査によるBSE罹患牛の蔓延度調査に使用され、食品の安全性確保に貢献している。第46回日本臨床化学会において、本検査試薬の開発に対して技術賞を受賞した。

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Flow Type Electrochemical Immuno Sensing Systems

発表者

山口豊（早稲田大学）, 本多信雄, 稲葉昌士,関口哲志,庄子習一（早稲田大学）

学会名

2006.10.22-25
IEEE-SENSORS 2006

内容

マイクロ流路内に、表面が磁性化された三次元櫛歯電極を、反応場と測定場に分けて作製し、全体をシステム化した。抗AFP抗体を固定化した磁気ビーズと、シースフローを利用したソーティング技術を用いて、抗原抗体反応と電気化学的測定を行った。AFP免疫測定の結果、25ng/ml から 500ng/mlの範囲に於いてAFP濃度と電流値の間に良い直線性が得られた。反応場と測定場を分けることによって、コンタミのない測定を再現性良く行うことが可能となった。

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Purification and Separation of viruses and virus-like particles by chromatography and membranes

発表者

宮川英二

学会名

2006.11.23-24
6th Ube Bioseparation Symposium "Separation of large biomolecules and bioparticles"

内容

ウイルス粒子の精製及び除去は生物製剤の製造工程で重要である。ヒトパルボウイルスB19（B19）は20-25nmとウイルスで最も小さく、エンベロープを持たないためアルコールに抵抗性であり、血液製剤の製造工程での除去が求められている。ヒトパルボウイルスB19感染性粒子をカラムクロマトグラフィーにより感染性を失うことなく迅速精製した。また、3種のCellulose Hollow Fiber(BMMS膜)を用いて、B19の除去を検討した結果、ポアサイズ20,15nmのBMMSで完全に補足することができた。